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鼠肠癌类器官培养基试剂盒

  • 货号:LMB-MCRC-100-KIT
  • 品牌:LMB
  • 规格:100kit
  • 货期:现货
  • 运输条件:2-8℃/-20℃

目录价:¥ 8500.00

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  • 产品描述

一、试剂盒产品信息  

 

序号

产品组成

规格

储存条件及周期

1

LMBTM组织保存液Ⅰ

100 ml

4℃:3个月;-20℃:1年

2

LMBTM清洗液Ⅱ

30 ml

4℃:3个月;-20℃:1年

3

LMBTM肠癌组织消化液Ⅲ

250 ml

4℃:3个月;-20℃:1年

4

LMBTM肠癌类器官培养基Ⅳ

100 ml

4℃:3个月;-20℃:1年

5

LMBTM传代消化液Ⅴ

30 ml

4℃:3个月;-20℃:1年

6

LMBTM传代缓冲液Ⅵ

250 ml

4℃:3个月;-20℃:1年

7

LMBTM类器官冻存液Ⅶ

20 ml

4℃:3个月;-20℃:1年

二、操作步骤 

1. 提取类器官原代

  1. 取材后将肠癌组织拍照并登记信息,迅速放在4 ℃预冷的含有组织保存液Ⅰ的取样管中。
  2. 将组织放入培养皿中,利用清洗液Ⅱ清洗3-5次后,利用眼科剪将肿瘤组织剪成体积约为 1~3 mm3的组织块。
  3. 加入适量肠癌组织消化液Ⅲ,37 ℃震荡消化10-20 min (该过程随时观察消化情况)。
  4. 取少量液体在显微镜下观察,镜下观察到较多的单个细胞或70 μm以下的细胞簇后, 加入三倍体积清洗液Ⅱ终止消化。
  5. 使用100 μm筛网进行过滤,收集滤液后在300 g 离心 5 min。弃上清后,添加清洗液Ⅱ重新重悬离心。
  6. 观察收集到的组织体积,添加 25-30倍组织体积的基质胶重悬铺板。
  7. 以24 孔细胞培养板为例,每孔点胶25 ul基质胶混合物进行铺板(将基质胶始终置于冰上)。
  8. 将铺好的培养板放入 37℃培养箱中 10- 15 min 成胶, 添加肠癌类器官培养基Ⅳ(恢复室温)进行培养。

2. 类器官传代培养

  1. 吸去培养基,每孔添加 1-2 ml 类器官传代缓冲液Ⅵ。轻柔吹打基质胶,收集在 15 ml 离心管中,4 ℃ 静置10 min。
  2. 如果类器官数量不足或体积较小,则离心 5min 弃去上清,添加适量类器官传代缓冲液Ⅵ,重悬移入1.5 ml 离心管,300 g离心5 min,弃去液体,进行第4步。
  3. 如果类器官数量较多或体积较大,则离心5 min弃上清,添加适量类器官传代消化液Ⅴ。消化2-3 min,添加类器官传代缓冲液Ⅵ终止消化,离心 5 min 弃去混合液,添加适量类器官传代缓冲液Ⅵ,重悬移入1.5 ml离心管,300 g离心5 min,弃去液体,进行第4步。 
  4. 类器官收集后,添加基质胶重悬,每孔25 μl基质胶铺在24孔细胞培养板中,放置培养箱中10-15 min,最后添加500 μl 肠癌类器官培养基Ⅳ。

3. 类器官冻存 

  1. 吸去培养基,每孔添加 1-2 ml 类器官传代缓冲液Ⅵ。轻柔吹打基质胶,收集在15 ml 离心管中,4 ℃ 静置10 min。
  2. 离心5min弃去上清,添加适量类器官传代缓冲液Ⅵ,重悬后300 g离心5 min,弃去上清。 
  3. 添加适量类器官冻存液Ⅶ,轻柔吹打重悬。在-80 ℃ 中进行程序降温,最后可移入液氮长期保存。

4. 类器官复苏

  1. 提前在15 ml 离心管中加入7-10 ml 类器官传代缓冲液Ⅵ。
  2. 从液氮罐中取出冻存的类器官细胞,快速置于37 ℃水浴锅中融解。
  3. 将溶解后的类器官细胞快速转移至 15 ml离心管,使用移液管轻轻吹打6-8次,300 g  离心5 min,然后除去上清液并收集类器官细胞沉淀。添加适量类器官传代缓冲液Ⅵ,重悬移入1.5 ml 离心管,300 g离心 5 min。
  4. 重悬基质胶,每孔 25 μl 基质胶铺在24孔细胞培养板中,放置培养箱中10-15 min 成胶,添加500 μl肠癌类器官培养基Ⅳ。

三、注意事项:

  1. 本产品仅限于科学研究使用,不得用于临床诊断等其他用途。  

  2. 为了您的生命安全,请遵守实验操作规范,穿实验服并佩戴一次性手套操作。

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